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为了在更小的长度尺度上研究生物体,科学家必须设计出新技术来克服所谓的衍射极限。这是显微镜聚焦小于所用光波长的物体的能力的内在限制。
结构照明显微镜是一种超分辨率技术,可以通过在样品上照射正弦图案光来获得更清晰的图像。然而,来自离焦区域的背景光仍然会模糊最终的图像。
在最近发表在《自然方法》杂志上的一项研究中,大阪大学的研究人员展示了一种超分辨率显微镜的新方法,能够观察单个细胞或细胞簇内部的结构。这是通过使用垂直于镜头投射的薄“光片”照明来仅选择所需的平面来成像以打开荧光团来实现的。
该研究的主要作者KentaTemma表示:“我们表明,选择性平面激活使我们能够以前所未有的出色清晰度对细胞内致密的微观结构进行成像。”也就是说,正弦“结构”光选择性地仅激发处于开启状态的荧光团局部化的薄平面,这允许无背景的超分辨率成像。
虽然以前的一些方法利用单分子的随机荧光发射,或“甜甜圈”形第二光源来停用或耗尽所需区域外的荧光源,但这种新方法对可能因强烈或长时间暴露于强光而受损的细胞更加温和。光。
研究人员认为,当试图了解具有空间结构的生命系统中发生的情况时,他们的方法特别有效,因为空间结构通常会在所需焦平面之外呈现背景光。这包括类器官,它是不同细胞类型的人工组装体,与在平坦培养皿上培养的细胞集合相比,可以更好地再现实际身体器官的行为。
“我们预计我们的技术将有助于未来3D细胞簇(包括类器官)的生物学研究,”资深作者KatsumasaFujita说。这同样适用于其他复杂的生物系统。
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