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由RuiBenedito领导的西班牙国家心血管研究中心(CNIC)科学家团队开发出一种新型基因工具,名为iSuRe-HadCre,能够高效可靠地诱导整个组织或单个细胞中的精确基因改变。这项新技术将成为利用小鼠模型修改和了解基因功能的生物医学研究的重要工具。
几十年来,分析基因功能的黄金标准方法一直是条件性Cre重组酶遗传学,它可以精确控制基因改变或基因表达。尽管出现了CRISPR/Cas9等新的基因靶向技术,但小鼠模型中的Cre-Lox系统在生物医学研究中的效率、精确度和广泛适用性方面仍然无与伦比。这种方法使研究人员能够在时间和空间上操纵基因表达,从而能够在特定组织和特定生物或疾病环境中研究基因功能。
然而,Cre-Lox系统的一个主要缺点是,其Cre介导重组的效率和时间控制不可避免地会因所用的特定转基因和floxed等位基因而发生变化。这种变化需要使用多种昂贵的遗传和分子控制来确认每个Cre依赖性条件遗传实验是否按预期进行。
为了克服这些限制,Benedito领导的CNIC团队之前开发了iSuRe-Cre技术,这是一种转基因小鼠模型,将永久Cre活性与荧光报告基因的表达联系起来。这解决了假阳性的问题,并且无需进行昂贵的额外检查和控制来验证目标基因的适当修改。
然而,第一代iSuRe-Cre等位基因仍然存在局限性,包括在某些细胞类型中偶尔出现泄漏、对Cre活性的敏感性相对较低、以及在Cre表达较高且持久的细胞中可能产生毒性。
在这项新研究中,CNIC团队开发了一种名为iSuRe-HadCre的新基因工具,可以克服这些限制。“该工具使用一种新型可诱导双重组酶基因级联,可确保荧光报告基因在所有以前具有但现在不再具有高Cre活性的细胞中表达,”第一作者IreneGarcíaGonzález说。
该项研究成果发表在《核酸研究》杂志上。
GarcíaGonzález解释说,“这种Cre的瞬时表达足以有效删除所有与loxP相邻的基因,同时避免Cre的永久表达引起的毒性。此外,新系统在任何细胞类型中都不会出现泄漏,并且对CreERT2及其配体他莫昔芬的诱导更为敏感。”
Benedito预测,“iSuRe-HadCre的这些特性和卓越性能将使其成为所有使用小鼠模型进行条件遗传研究的实验室不可或缺的工具。”
Benedito补充道,iSuRe-HadCre“对于需要同时高效可靠地修改多个基因的成像研究、单细胞基因分析和基因上位性研究特别有价值”。
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