当用显微镜观察生物样本时，如果物镜的透镜与样本处于不同的介质中，光束就会受到干扰。例如，当使用被空气包围的透镜观察水样本时，光线在透镜周围的空气中比在水中弯曲得更剧烈。

这种干扰导致样品中的测量深度小于实际深度。结果，样品显得扁平。

“这个问题早已为人所知，自80年代以来，已经发展了一些理论来确定确定深度的校正因子。然而，所有这些理论都假设该因子是恒定的，无论样本的深度如何。尽管后来的诺贝尔奖获得者StefanHell在90年代指出这种缩放可能与深度相关，但这种情况还是发生了，”代尔夫特理工大学副教授JacobHoogenboom解释道。

计算、实验和网络工具

代尔夫特理工大学前博士后谢尔盖·洛吉诺夫(SergeyLoginov)现在通过计算和数学模型表明，靠近镜头的样本确实比远离镜头的样本更明显地扁平化。博士候选人DaanBoltje和博士后ErnestvanderWee随后在实验室证实，校正因子与深度相关。

最后一位作者欧内斯特·范德韦(ErnestVanderWee)说：“我们已将结果编译成随文章提供的网络工具和软件。通过这些工具，任何人都可以确定其实验的精确校正因子。”

了解异常和疾病

“部分归功于我们的计算工具，我们现在可以非常精确地从生物系统中切出蛋白质及其周围环境，从而通过电子显微镜确定其结构。这种类型的显微镜非常复杂、耗时且昂贵。因此，寻找正确的结构非常重要。”研究员DaanBoltje说道。

“通过更精确的深度测定，我们需要在错过生物目标的样本上花费更少的时间和金钱。最终，我们可以研究更多相关的蛋白质和生物结构。并确定生物系统中蛋白质的精确结构对于理解并最终对抗异常和疾病至关重要。”

在提供的网络工具中，您可以填写实验的相关详细信息，例如折射率、物镜的孔径角以及所用光的波长。然后，该工具会显示与深度相关的缩放因子的曲线。您还可以导出此数据供您自己使用。此外，您可以结合每个现有理论的结果绘制结果。

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