研究人员的工作不仅包括不断追求新发现，还包括仔细关注传统的、已建立的知识。有时，可靠且看似行之有效的方法具有以前被忽视的特征。

由高等经济大学生物与生物技术学院院长亚历山大·托内维茨基领导的一组研究人员在microRNA过表达方法中发现了这种特性。科学家们发现，在某些情况下，使用这种方法的实验结果可能不正确，而且这些错误很难被发现。研究结果发表在《生物化学与生物物理学报(BBA)——基因调控机制》杂志上。

微小RNA(miRNA)是小RNA分子，长度约为20至25个核苷酸。它们通过确定细胞中从特定信使RNA(mRNA)分子合成多少蛋白质，在调节基因表达方面发挥重要作用。这种调节由miRNA内的短片段促进，如果找到反向互补(生物相容)序列，该短片段可以与目标mRNA分子结合。当发生这种情况时，mRNA的蛋白质合成会停止，导致基因表达下降。

随着疾病(包括癌症)的发展，人们观察到microRNA表达水平的变化。具体来说，在前列腺癌中，miR-93-5pmicroRNA的数量增加，其表达水平越高，疾病的侵袭性就越大。通过显著增加实验室细胞中的miRNA数量，研究人员可以更清楚地了解与此miRNA表达升高相关的过程。

miRNA过表达的常见方法是首先增加细胞中前体RNA的数量(前体RNA是一种较长的分子，随后通过Dicer酶裂解生成miRNA)。这是细胞的自然过程。然而，由此形成的miRNA序列取决于Dicer酶裂解前体分子的准确程度。

论文作者研究了Dicer酶如何切割分子。他们在前体分子中编码了所需的序列，预计Dicer会按照预期准确地切割它。然而，事实证明Dicer并不总是像科学家预期的那样运作。这种酶的主要功能就像一把分子尺，始终测量22个核苷酸的长度。

在前体分子的合成过程中，通常会在序列末端添加一个或多个尿嘧啶(RNA特有的核苷酸碱基)。因此，如果给定的miRNA序列长于19个核苷酸，则添加的尿嘧啶会导致Dicer在非预期位置切割分子。这种转变导致miRNA异构体的形成。

为了研究前体分子切割位置发生偏移的原因，科学家们通过实验设置了几个不同长度的miRNA序列，其中包括与miR-93-5pmiRNA相对应的23个核苷酸链。利用测序(一种完全解密RNA或DNA分子核苷酸序列的方法)，科学家们观察到，在长度超过19个核苷酸的链中添加尿嘧啶会导致切割位置发生偏移。

miR-93-5pmiRNA异构体的形成导致HMGA1基因表达下降，该基因在细胞分裂过程中起着破坏遗传信息传递的作用，并调节基因表达的作用。然而，HMGA1并不是miR-93-5p标准形式的靶标。如果不了解miRNA异构体的形成，人们可能会对所研究的miRNA在前列腺癌中的分子机制得出错误的结论。

“同工型可能会靶向错误的mRNA分子，而不是实验中预期的分子，从而抑制非预期基因。了解这种特性对于基础研究和医学应用都至关重要，”高等经济大学微生理系统国际实验室负责人DianaMaltseva表示。

世界各地的科学家都在实验中使用miRNA过表达方法。通常，使用聚合酶链式反应(PCR)来验证结果的准确性。然而，这种方法在本例中不够灵敏。

“我们的研究表明，只有测序才能揭示切割位置的变化。不幸的是，测序是一种相对昂贵的方法，并不是所有的实验室都能负担得起。因此，开发新的miRNA过表达方法并精心设计实验至关重要，”Maltseva评论道。

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